Innhold
Tuberkulose er en smittsom sykdom forårsaket av bakterien Mycobacterium tuberculosis og er en luftveissykdom preget av knollformasjoner, nekrose, abscesser, fibrose og forkalkning i lungene. Det kan også infisere nyrene, lymfeknuter, bein, ledd og hud.
Den primære laboratoriediagnosen av denne basillen innebærer farging av den for å visualisere bakteriene under mikroskopet. Valget av prøven er sputum eller bronkoalveolær skylling for å identifisere luftveisinfeksjon eller en prøve av faktisk vev.
Fysiologi
Mycobacterium tuberculosis er en stavformet organisme (basiller), ikke-mobil, ikke-obligatorisk spore. Denne bakterien måler 0,4 x 3 mikrometer i lengde og gjennomgår binær fisjon (deling av reproduksjonscellen) hver 15. til 24 timer, noe som anses som treg sammenlignet med andre bakterier. På grunn av dette kan det ta opptil ni uker før mycobacterium vises i dyrkningsmediet.
Denne organismen er følsom for UV-lys og varme (for eksempel pasteurisering), men motstår kjemiske desinfeksjonsmidler.
Gram flekk
Mycobacterium tuberculosis kan ikke virkelig klassifiseres som gram-positiv eller gram-negativ. Denne klassifiseringen er laget basert på mengden peptidoglykan i celleveggen til en bakterie. En gram-positiv art har et tykt lag av dette molekylet (ca. 90%), mens en gram-negativ art har et tynt lag (fra 5% til 20%). Gramflekker trenger inn i celleveggen og binder seg til de kjemiske komponentene i den. Under mikroskopet blir de fargede bakteriene lilla eller rosa.
Med mycobacterium tuberculosis består celleveggen av peptidoglycan, men også komplekse lipider som hemmer gramfargestoffgjennomtrengning. Celleveggen motstår også misfarging av syre eller alkohol, og det er derfor mycobacterium kalles "syreresistent". Cellevegglipider er mykolsyre, strengfaktor og D-voks. Hvis bakteriene skulle farges, ville cellene virke grampositive eller svakt bleke med veldig lite farge.
For å se bakteriene, må spesielle flekker, som Aumarine eller Zhiel-Neelson-flekk, brukes.
Aumarine-rodamin flekk
Prosessen ved bruk av auramin-rodamin bruker et gult fluorescerende fargestoff for å visualisere mycobacterium tuberculosis under et fluorescensmikroskop. Kaliumpermanganat eller akridinoransje kan brukes som kontrastfargestoff. Under linsen vil bakteriecellene fremstå som grønne.
Auramin-rodaminfargestoffet er mer følsomt enn Zhiel-Neelson og mer økonomisk levedyktig.
Ziehl-Neelson fargelegging
Ziehl-Neelson-flekken ble laget av forskerne Franz Ziehl og Friedrich Neelsen, og bruker oppvarmet karbol-fuchsin, en høy konsentrasjon av syre-alkohol og et kontrastfargestoff, som grønn malakitt eller metylenblått. Under et fluorescensmikroskop vil bakteriecellene fremstå som lyserosa.
Ziehl-Neelson-fargestoffet er standard for fremragende kvalitet for den foreløpige identifikasjonen av mycobacterium tuberculosis og mycobacterium leprae.
Agar
Sekundært til identifikasjon av mikroskopi, må mycobacterium tuberculosis dyrkes på en spesiell agarkultur. Lowenstein-Jensen gelatin har komplekse organiske stoffer (som egg og poteter), salter, glyserol og malakittgrønt (som hemmer andre bakterier). Antibiotika kan tilsettes for ytterligere å hemme forurensende mikroorganismer. Prøven plasseres på denne agaren, og bakteriene vokser på tre til ni uker.
En næringskulturløsning, som albumin og biotin, kan brukes til å støtte veksten av selv den minste mengden målbakterier. Dette er kjent som Middlebrook 7H9 (eller 7H12).
I begge medier vil koloniene fremstå som små, polerte, lysebrune kolonier.
Med avansert teknologi kan mycobacterium tuberculosis nå dyrkes ved hjelp av en automatisert leser. En flytende løsning av Middlebrook 7H9-medium og en fluorescerende indikatorforbindelse brukes til å overvåke vekst og rapportere positiv eller negativ infeksjon.