Innhold
De kjemiske forbindelsene cetyltrimetylammoniumbromid, heksadecyltrimetylammoniumbromid, palmityltrimetylammoniumbromid og cetrimoniumbromid er alle kjent også av CTAB. Kjemikaliet brukes som en pH-vedlikeholder i DNA-sekvensielt genom, spesielt plantene.
Formel CTAB
Mengden av formlene av de forskjellige CTAB-kjemikaliene varierer avhengig av laboratoriet. Imidlertid inkluderer alle ingrediensene 1 M Tris HCl pH 8,0, 0,5 M EDTA, 5 M NaCl og H20 (noen ganger to ganger destillert). For CTAB-komponenten bruker noen laboratorier cetyltrimetylammoniumbromid og andre heksadecyltrimetylammoniumbromid.
Tilberedning av vegetabilsk vev
Fremstillingen av plantevævet kan variere, avhengig av materialet. Vegg og cellemembraner må brytes for å få tilgang til kjernefysisk materiale uten nedbrytning. Ved fresing gir plantemateriale med flytende nitrogen normalt tilgang til DNA, som holder skadelige cellulære enzymer og inaktive kjemikalier.
Suspensjon og sentrifugering
Det knuste vevet plasseres på CTAB-bladet og settes i en bolle med rennende vann. Den blandes deretter med kloroform og sentrifugeres for å separere de løselige proteiner og andre materialer. Dnaet utfelles deretter fra den vandige fase og vaskes forsiktig for å fjerne forurensende salter. Det rensede DNA trekkes deretter tilbake og lagres på et TE-glidelås eller sterilt destillert vann.